建立高效的hiPSC单细胞克隆的新标准

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在本次网络研讨会中,我们展示了许多hiPSC细胞系可以使用Solentim VIPS®单细胞铺板仪与一种新的可溶性基质MatriClone™(可从Advanced Instruments购买)结合使用,以强大和自动化的方式成功地进行亚克隆,从而减少时间和成本,同时最重要的是维持单克隆的生物学完整性。

首先,我们表明,与手动LD相比,VIPS加MatriClone组合可使hiPSC的单克隆生长效率提高数倍。其次,通过VIPS进行每日全孔成像,从假定健康和受疾病影响的背景中鉴定出许多hiPSC亚克隆,并在铺板后约10-14天进行扩增。我们证明了每个亚克隆均具有多能性表达。最后,我们证明了亚克隆在长期培养后维持了基因组完整性,并成功分化为混合皮质神经元。

我们将讨论这种工作流程在未来的转化如何对GMP标准产生积极影响,并重新建立监管机构对高级细胞模型、细胞诊断和细胞治疗的开发和生产的期望,包括未来IND提交相关的克隆性文件的期望。